推荐 使用条件
储存 缓冲液 : 20 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 2 mmol/L MgCl 2 , 20 mmol/L NaCl, 50% (v/v) 甘油
最适 pH : 8.0 , pH 适用 范围 : 6 ~ 10 ,可用 50 mmol/L TRIS-HCL 或 PBS 的缓冲体系
最适温度: 37 ℃,温度 适用范围 : 0 ~ 42 ℃
反应时间:( 15 ~ 37 ℃ )时,反应时间 30 ~ 60min ;( 2 ~ 8 ℃ )时,反应时间 60min 以上 ( 温度越低 ,需要延长 反应时间 才能达到效果)
辅助因子:向反应体系加入适量 MgCL 2 ,使得 Mg 2+ 达到 2 ~ 10mmol/L ,促进反应。
用量: Biolonase 核酸酶有效工作浓度为 10 ~ 100 u /ml ,首次使用建议 50 u /ml 。
用法:建议在悬浮菌体时加入 Biolonase 核酸酶 , 尽早 加入 可增加反应时间, 降低 核酸效果越好 。
典型应用
1.用于除去产品中的 DNA/RNA
中国药典 2020 版三部对 Vero 细胞培养疫苗要求外源 DNA 残留不超过 100pg· 剂量 -1 ,乙型脑炎灭活疫苗不高于 100pg· 剂量 -1 , 冻干 人用狂犬病疫苗 不高于 3ng· 剂量 -1 ,大肠杆菌及酵母表达的治疗类基因工程重组产品,其残余 DNA 应不超过 10ng· 剂量 -1 ,对于 CHO 细胞表达的重组蛋白制品, DNA 残留量不超过 100pg· 剂量 -1 。 Biolonase 核酸酶可以将核酸水解为 3 ~ 5 个碱基对的寡聚核苷酸碎片,这些片断极易被除去或不被检出(同时也不具有大分子 DNA 所具有的危害),从而使产品核酸含量符合要求。
2.用于降低细胞破碎后的粘度
Biolonase 核酸酶可以水解核酸,降低细胞溶解产物的粘度,从而提高蛋白质的产量、改善离心分离效果、使过滤(尤其是超滤)变得容易、增加层析纯化的效率。
3.用于微粒处理过程中改善微粒的纯化过程
核酸很容易粘附在病毒颗粒、包涵体颗粒等细胞生成颗粒的表面,造成这些颗粒的凝聚,使颗粒大小或电荷发生改变而影响分离。 Biolonase 核酸酶能有效的避免核酸的对纯化影响、提高产量。
4.用于生化分析中样品的制备
在 ELISA 、色谱分析、双相电泳和足印分析中,用核酸酶处理含有核酸的样品,可以提高分辨率、提高回收率。
应用举例
例 1. 降低大肠肝菌裂解液黏度
取大肠杆菌 BL21 ( DE3 ) 7.5g (湿重)悬浮于 15ml 缓冲液( 10 mmol/L Tris-HCl , 1 mmol/L EDTA , pH9.0 )。加入 MgCl 2 使其终浓度为 6 mmol/L 。分别取 5ml 大肠杆菌悬浮液,加入核酸酶使其浓度递增。
加入核酸酶后,悬浮液通过高压匀质器( 10000psi ),然后立即放入 0 ℃ 下。在不同的时间间隔,用枪头吸入悬浮液,然后滴下,获得 “ 水滴 ” 效果 为 判定粘度降低 标准。 以下为不用酶用量,与粘度 降低 所需时间 对比。
核酸酶 使用 浓度( U/ml ) | “ 水滴 ” 效果 所用 ( min ) |
0.24 | > 60 |
2.40 | 15 |
8.0 | 5 |
24.0 | 1.25 |
例 2. 核酸去除
将鲱鱼精子 DNA 溶于缓冲液( 50 mmol/L Tris-HCl , 1 mmol/L MgCl 2 , 0.1mg/ml BSA , pH8.0 )中,制备成供试液。供试液在不同温度下( 0 ℃ 、 23 ℃ 、 37 ℃ )用不同浓度的 Biolonase 核酸酶处理。在不同的时间间隔,取出 10μl (最初含有 500ng DNA )转移到硝酸纤维素膜上。以用 32P 标记的鲱鱼精子 DNA 为探针,进行斑点杂交。标准 DNA 量从 100ng 到 10pg ,用于核酸残留半定量计算。
不同处理时间后剩余可杂交鲱鱼精 DNA 量( ng )
Biolonase 核酸酶浓度 | 0h | 4h | 6h | 22h |
90U/ml | 500 | 0.2 | 0.02 | 无斑点 |
9U/ml | 500 | 5 | 2 | 0.3 |
Biolonase 核酸酶浓度为 90U/ml ,供试液在不同温育时间下残留 DNA 量( ng )
孵育温度 | 0h | 4h | 6h | 22h | 30h |
37 ℃ | 500 | 0.20 | 0.02 | 无斑点 | 无斑点 |
23 ℃ | 500 | 0.5 | 0.100 | 0.01 | 无斑点 |
0 ℃ | 500 | 1 | 0.500 | 0.05 | 0.01 |
Biolonase 核酸酶浓度为 90U/ml ,供试液在不同温育时间下残留 DNA 量( ng )
缓冲液 | 0h | 4h | 6h | 22h | 30h |
Tris ( 23 ℃ ) | 500 | 0.2 | 0.02 | 无斑点 | 无斑点 |
PBS ( 23 ℃ ) | 500 | 0.5 | 0.1 | 0.01 | 无斑点 |