推荐 使用条件

储存 缓冲液 ： 20 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 2 mmol/L MgCl ₂ , 20 mmol/L NaCl, 50% (v/v) 甘油

最适 pH ： 8.0 ， pH 适用 范围 ： 6 ～ 10 ，可用 50 mmol/L TRIS-HCL 或 PBS 的缓冲体系

最适温度： 37 ℃，温度 适用范围 ： 0 ～ 42 ℃

反应时间：（ 15 ～ 37 ℃ ）时，反应时间 30 ～ 60min ；（ 2 ～ 8 ℃ ）时，反应时间 60min 以上 （ 温度越低 ，需要延长 反应时间 才能达到效果）

辅助因子：向反应体系加入适量 MgCL ₂ ，使得 Mg ²⁺ 达到 2 ～ 10mmol/L ，促进反应。

用量： Biolonase 核酸酶有效工作浓度为 10 ～ 100 u /ml ，首次使用建议 50 u /ml 。

用法：建议在悬浮菌体时加入 Biolonase 核酸酶 ， 尽早 加入 可增加反应时间， 降低 核酸效果越好 。

典型应用

1. 用于除去产品中的 DNA/RNA

中国药典 2020 版三部对 Vero 细胞培养疫苗要求外源 DNA 残留不超过 100pg· 剂量 ^-1 ，乙型脑炎灭活疫苗不高于 100pg· 剂量 ^-1 ， 冻干 人用狂犬病疫苗 不高于 3ng· 剂量 ^-1 ，大肠杆菌及酵母表达的治疗类基因工程重组产品，其残余 DNA 应不超过 10ng· 剂量 ^-1 ，对于 CHO 细胞表达的重组蛋白制品， DNA 残留量不超过 100pg· 剂量 ^-1 。 Biolonase 核酸酶可以将核酸水解为 3 ～ 5 个碱基对的寡聚核苷酸碎片，这些片断极易被除去或不被检出（同时也不具有大分子 DNA 所具有的危害），从而使产品核酸含量符合要求。

2. 用于降低细胞破碎后的粘度

Biolonase 核酸酶可以水解核酸，降低细胞溶解产物的粘度，从而提高蛋白质的产量、改善离心分离效果、使过滤（尤其是超滤）变得容易、增加层析纯化的效率。

3. 用于微粒处理过程中改善微粒的纯化过程

核酸很容易粘附在病毒颗粒、包涵体颗粒等细胞生成颗粒的表面，造成这些颗粒的凝聚，使颗粒大小或电荷发生改变而影响分离。 Biolonase 核酸酶能有效的避免核酸的对纯化影响、提高产量。

4. 用于生化分析中样品的制备

在 ELISA 、色谱分析、双相电泳和足印分析中，用核酸酶处理含有核酸的样品，可以提高分辨率、提高回收率。

应用举例

例 1. 降低大肠肝菌裂解液黏度

取大肠杆菌 BL21 （ DE3 ） 7.5g （湿重）悬浮于 15ml 缓冲液（ 10 mmol/L Tris-HCl ， 1 mmol/L EDTA ， pH9.0 ）。加入 MgCl ₂ 使其终浓度为 6 mmol/L 。分别取 5ml 大肠杆菌悬浮液，加入核酸酶使其浓度递增。

加入核酸酶后，悬浮液通过高压匀质器（ 10000psi ），然后立即放入 0 ℃ 下。在不同的时间间隔，用枪头吸入悬浮液，然后滴下，获得 “ 水滴 ” 效果 为 判定粘度降低 标准。 以下为不用酶用量，与粘度 降低 所需时间 对比。

例 2. 核酸去除

将鲱鱼精子 DNA 溶于缓冲液（ 50 mmol/L Tris-HCl ， 1 mmol/L MgCl ₂ ， 0.1mg/ml BSA ， pH8.0 ）中，制备成供试液。供试液在不同温度下（ 0 ℃ 、 23 ℃ 、 37 ℃ ）用不同浓度的 Biolonase 核酸酶处理。在不同的时间间隔，取出 10μl （最初含有 500ng DNA ）转移到硝酸纤维素膜上。以用 32P 标记的鲱鱼精子 DNA 为探针，进行斑点杂交。标准 DNA 量从 100ng 到 10pg ，用于核酸残留半定量计算。

不同处理时间后剩余可杂交鲱鱼精 DNA 量（ ng ）

Biolonase 核酸酶浓度为 90U/ml ，供试液在不同温育时间下残留 DNA 量（ ng ）

Biolonase 核酸酶浓度为 90U/ml ，供试液在不同温育时间下残留 DNA 量（ ng ）